СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ВЛИЯНИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ НА КОНФОРМАЦИЮ БЕЛКА

Описание
Изобретение относится к биохимии. Предложен способ выявления влияния низкомолекулярных биологически активных лигандов на конформацию белка, при котором биологически активный лиганд низкомолекулярной массы в концентрациях 16 мкМ, 8 мкМ, 4 мкМ, 2 мкМ, 1 мкМ, 0,5 мкМ вносят в микрокапилляры «nanoDSF grade», содержащие белок в конечной концентрации 1 мкМ, получая опытные пробы, контрольной пробой служит раствор, содержащий белок в такой же конечной концентрации без добавления низкомолекулярного соединения; 10 мкл каждой из полученных опытных проб инкубируют в течение 5 минут в темном месте при температуре 25°С; проводят измерение эндогенной флуоресценции по остаткам тирозина и триптофана на приборе Prometheus NT.48 при интенсивности лазера 30%, длинах волн 330 и 350 нм, диапазоне нагрева от 20°С до 95°С, с шагом 1°С/мин; строят график зависимости флуоресценции от температуры нагревания, строят графики первых производных для полученных кривых; рассчитывают значение температуры пика и значение первой производной в точке пика для контрольной и опытных проб, рассчитывают отношения значений первой производной в точке пика опытной и контрольной проб в процентах, значение первой производной в точке пика контрольной пробы принимают за 100%, при изменении отношения >15% по сравнению с контрольной пробой говорят об изменении конформации белковой молекулы в сторону разворачивания, при изменении отношения <-15% по сравнению с контрольной пробой говорят об изменении конформации белковой молекулы в сторону сворачивания, при изменении отношения от -15% до 15% включительно говорят об отсутствии влияния выбранного низкомолекулярного лиганда на конформацию белковой молекулы. Изобретение обеспечивает объективную оценку конформационного состояния белковой молекулы. 1 ил., 3 табл., 3 пр.
Тэги
Дата
2019-06-13
Патентообладатели
"Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования ""Самарский государственный медицинский университет"" Министерства здравоохранения Российской Федерации "
Авторы
Кузьмичева Валерия Игоревна , Гильмиярова Фрида Насыровна , Колотьева Наталия Александровна , Рыскина Елена Анатольевна , Ремизов Василий Владимирович , Виноградова Дарья Сергеевна
Номер заявки
RU 02698628 C1 20190828
Предметная область
Биохимия и биотехнологии
Ссылка на ФИПС